| 目的 探讨小豆蔻明通过激活NOD样受体蛋白3(nod-like receptor protein3,NLRP3)/胱天蛋白酶-1(cysteine-dependent aspartate-specific protease-1,Caspase-1) 信号通路抑制肾癌细胞侵袭和转移的机制。 方法 在肾癌细胞系 A498 中加入不同浓度的小豆蔻明, 采用 CCK-8 实验观察不同药物浓度下的细胞存活率变化, 确定最佳药物浓度再进行后续实验。 将 A498 细胞分为小豆蔻明组和对照组, 采用平板克隆实验检测细胞克隆形成数量、 划痕实验检测细胞迁移数量、Transwell 实验检测细胞侵袭数量, 以 Western Blot 实验检测焦亡的关键上游激活分子、 细胞焦亡关键效应分子及上游转录调控指 标: [ 活 化 的 胱 天 蛋 白 酶-1 (cleaved cysteine-dependent aspartate-specific protease-1, cleavedCaspase-1) 、 活化的白细胞介素-1β(cleaved interleukin-1β,cleaved-IL-1β) 、Gasdermin D 的 N 端裂解片段(Gasdermin D N-terminal, GSDMD-N) ] 表达, 酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) 实验检测白细胞介素-1β(interleukin-1,IL-1β) 及白细胞介素-18(interleukin-18, IL-18)水平, 实时定量逆转录聚合酶链式反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR) 实验检测IL-1β、IL-18 的 mRNA 表达。 结果 双因素方差分析显示, 小豆蔻明浓度(0、2.5、5、10、20、40、80 μM) 和作用时间(24 h、48 h、72 h) 对细胞存活率有显著主效应(F 浓度 =1 818.994,F 时间 =79.405,P <0.05) , 且存在浓度-时间交互效应(F 交互 =9.205,P <0.05) 。 进一步的简单效应分析表明, 在24 h、48 h 和72 h, 不同浓度小豆蔻明组的细胞存活率均低于同期对照组(P 均<0.05) ; 当小豆蔻明浓度≥20 μM 时, 小豆蔻明组在24 h、48 h、72 h 的细胞存活率均低于同期对照组(P均<0.05) , 且抑制作用随药物浓度升高和作用时间延长而增强, 呈现出剂量-时间依赖性抑制效应。 当小豆蔻明浓度≥20 μM 时, 小豆蔻明组细胞克隆数、 划痕愈合率、 细胞迁移数低于对照组(P 均<0.05) 。当小豆蔻明浓度≥20 μM 时, 小豆蔻明组 NLRP3、cleaved-Caspase-1、cleaved-IL-1β、GSDMD-N 的表达水平高于对照组(P 均<0.05) 。 小豆蔻明组IL-1β 及IL-18 的表达水平高于对照组(P 均<0.05) 。 结论 小豆蔻明可通过激活 NLRP3/Caspase-1 信号通路促进肿瘤细胞焦亡, 抑制肾癌细胞的增殖、 侵袭和转移, 为临床上防治肾癌提供实验依据。 |